ELISA主要有以下四种类型:直接ELISA(抗原被吸附的板;筛选抗体)间接ELISA(抗原被吸附的板;筛选抗原/抗体)夹心ELISA(抗体被吸附的板;筛选抗原)竞争性ELISA(筛选抗体)直接ELISA在直接ELISA中,蛋白质抗原被吸附到孔中,并冲洗来未吸附抗原的量。然后,通过标记的抗体直接检测抗原。优缺点分析优点1快速,*使用一种抗体且步骤较少2消除了第二抗体的交叉反应性缺点1细胞涂片:通过化学键将非粘附细胞粘附在盖玻片上2一抗的免疫反应性可能受到酶或标签标记的不利影响3为每个特定的ELISA系统标记一抗,既费时又昂贵4由于标记的抗体密度较低导致较低的灵敏度间接ELISA在间接ELISA中,蛋白质非特异性吸附到孔中。因为通过使用二抗间接检测抗原,检测分两个步骤进行,所以称为间接ELISA。在次检测中添加了抗原特异性的未标记抗体,然后添加检测抗体的第二抗体。优缺点分析优点1可以在一个物种中制备许多一抗,并且可以将相同的标记二抗用于检测2由于没有标记,保留了抗体的更大免疫反应性3高标记的二抗密度可实现高灵敏度,从而导致信号放大缺点1细胞涂片:通过化学键将非粘附细胞粘附在盖玻片上2二抗可能会发生交叉反应。
从而导致非特异性信号3这个过程中需要一个额外的孵育步骤夹心ELISA夹心ELISA通常需要使用配对的抗体对,其中每种抗体都对抗原分子的不同,不重叠的部分(表位)具有特异性。抗体(称为捕获抗体)被吸附到孔中,然后将样品溶液添加到孔中。第二抗体(称为检测抗体)在这个步骤之后测量样品的浓度。优缺点分析优点1高特异性:特异性捕获和检测抗原/分析物2适用于复杂或粗/不纯样品:测量前无需纯化抗原3灵活性和灵敏度:可以进行直接或间接检测方法但是,夹心ELISA需要两种针对同一抗原不同表位的抗体。因此,可能需要定制抗体的开发。竞争ELISA竞争性ELISA是一项复杂技术,特别适合于小抗原。竞争性ELISA主要用于测量样品中抗原(或抗体)的浓度。原理是检测样品抗原或抗体与标记的结合参照物(抗原或抗体)之间的竞争所引起的信号输出干扰。由于信号是由标记的参比物诱导的,因此规则如下:“信号越弱,样品中分析物的浓度越高”。竞争性ELISA基于直接,间接或夹心ELISA的检测方法。因此,优缺点与所选择的技术有关。ELISA应用ELISA具有的应用,包括针对人类免疫缺陷(HIV)的快速抗体筛选测试,COIVD-19以及其他,细菌,,自身免疫性疾病,食物过敏原,血型,孕hCG的存在。
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