解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物Ig(s),但加入量不足或亚类不同时无效。(4)嗜靶抗原的自身抗体抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现,解决的办法是:测定前需用理化方法将其解离后再测定。(5)医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体临床开展的用鼠源性CD3等单克隆抗体,用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向等新技术,均有可能使这些病人体内产生抗鼠抗体;另外,被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠Ig(s)抗体。这些病人ELISA测定时均可产生假阳性。解决的办法是:测定抗原时,在标本中加入足量的正常鼠Ig(s),从而克服由于上述原因造成的假阳性。(6)交叉反应物质类地高辛、类AFP样物质等,是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大,但在用单克隆抗体测定抗原时,假如交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时,也会出现假阳性结果。(7)标本中其它成分的影响血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及粘度过大等,均对ELISA测定结果有干扰作用。
必要时进行ELISA样本的稀释及选择合适检测范围的试剂盒极其重要。若浓度太低,可选择高敏试剂盒;若不确定待测浓度或样本间浓度差异较大,建议使用检测动态范围更宽的化学发光法ELISA试剂盒。如同样为IL-6ELISA试剂盒,各类型检测范围差异较大,需要根据实际情况选择合适的试剂盒。第四步:检查试剂盒进行过哪些质控质控数据在说明书中即可找到,在购买前检查试剂盒是否进行过严格的质控实验,包括批次内(Intra-Assay)及批次间(Inter-Assay)、掺入回收实验、线性稀释实验及交叉反应测试等,每个数据比较好都看一下,确保的结果重现性及准确性。第五步:确定需检测的因子数量如果待测因子超过5个,且样本量较小时,单因子ELISA检测方法并不是比较好选择。建议考虑多因子检测方法,如固相芯片(样本数量一般5个以内,检测指标可达上百个)及Luminex液相芯片方法(检测样本多达80个,检测指标多达50个)或微流控ELISA检测系统Ella。可节约样本及时间成本,也可保证检测结果准确。第六步:预算评估预算往往是大家优先考虑的,实际上,不能够一味讲究产品价格,更需要考虑性价比。生物学是极其严谨的科学,一致性的实验结果是基金、文章等评审过程中必不可少的因素,即使低廉的价格。
熙宁生物(Accurant BioTech Inc)是一家专业的符合国际GLP&GCP质量管理规范的大分子生物分析实验室,为国内外生物医药公司提供临床和临床前大分子生物分析的一站式服务,包括抗体制备,样本采集包及实验室手册,符合法规要求的分析方法的开发和验证,以及样本分析。包含药代动力学(PK), 药效学(PD),抗药抗体(ADA),中和抗体(NAb),生物标志物(Biomarker),及受体占位(RO) 免疫细胞分型,胞内因子,CART PK/PD等基于流式细胞术和 qPCR分析平台的相关检测。 公司领导团队平均有近20年的专业经验,多位在国际**药企和CRO工作多年的海归博士、大分子生物分析**、中美多个行业协会的常任理事,曾参与《中国药典2015版》“生物样品分析方法验证指导原则”,及多个国际上行业白皮书的撰写,支持过200+全球多中心临床试验,100+各类大分子产品。为多个国际重磅级药物提供上市审批数据支持。 公司在宁波(宁波熙宁检测技术有限公司)、上海(上海精翰生物科技有限公司)、美国新泽西(Accurant Bio)都建有实验室。
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