湖南ELISA结合 宁波熙宁检测技术供应

    血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种。1.内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。（1）类风湿因子人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕捉抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。解决该情况的办法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。（2）补体ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q可以将二者连接起来，从而造成假阳性。解决的办法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10min或56℃，30min加热血清使C1q灭活。（3）嗜异性抗体人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig(s)结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。

    2.外源性物质外源性物质经常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被污染、标本贮存过久、标本凝集不全和**管中添加物等影响。（1）标本溶血由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，会导致非特异性显色，干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注重避免溶血。（2）标本受细菌污染因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。（3）标本保存不当在冰箱中保存过久的标本，血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性；标本放置时间过长（如以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。（4）标本凝集不全在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下。

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